JN江南体育我国科研团队开发出CRISPR/Cas13基因编辑新工具
科技日报记者 吴纯新 通信员 蒋朝常 余博
12月8日,记者从华中农业年夜学得悉,该校植物科学手艺学院棉花遗传改进团队金双侠传授的一项最新科研功效,日前在《基因组生物学》杂志在线颁发。
这项研究展现了来自5个亚型的7个Cas13同源物的完全编纂谱系,周全评估了这些编纂东西的效力,特点和脱靶效应。操纵7种CRISPR/Cas13实现内源mRNA的靶向降解和外源病毒的靶向干扰,创制一系列弱突变体和抗性种质资本。
作为RNA特异性靶向东西,CRISPR/Cas13手艺供给了一种壮大而有用的方式,这类精度对揭露多种类型RNA在植物发展发育进程中的感化,如发育、应激反映等相当主要,这为植物功能研究和作物改进供给了新的手艺手段。
据介绍,与CRISPR/Cas9介导的GhCLA和GhPGF基因敲除的突变体表示出的完全白化或腺体消逝的表型比拟,CRISPR/Cas13介导的敲低材料表示出分歧水平JN江南·(中国区)体育官方网站-JN SPORTS的叶绿素含量降落或腺体数目削减,这一成果注解,CRISPR/Cas13是创制植物弱突变体材料的有力东西。
研究团队进一步评估了GhCas13x.1和GhCas13y.1操纵双靶标同时敲低两个内源转录本的效力,成果显示这两个编纂器对GhCLA和GhPGF基因的平均编纂效力最高都可达50%。但两个靶标基因在表达程度上始终一高一低,猜测多是两个靶标竞争性连系有限的Cas13卵白所引发的编纂差别。这一成果证实了GhCas13编纂器针对多个转录本进行多重靶向敲低的可行性。
对上述7种GhCas13编纂器的特异性和其潜伏脱靶效应的评估成果注解,未不雅察到Cas13的旁切活性可能引发mRNA程度整体下调。猜测高脱靶非方针转录本的转录程度转变其实不较着,所不雅察到下调DEGs并不是因为传统的脱靶效应致使。
此中,很年夜一部门下调DEGs的发生缘由多是靶标转录本的定向下调或植物响应外部刺激的防御反映。剩下数目有限的DEGs多是布景噪声。相较在普遍的棉花基因组,剩下的这些DEGs几近可以疏忽不计。
是以,该研究团队认为CRISPR/Cas13是一种切确靠得住的转录组靶向敲低东西,具有较高的编纂效力和可疏忽不计的脱靶效应。
(受访单元供图)
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